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Objetivos: La criopreservación de espermatozoides es una técnica importante para ayudar a la fertilidad. Para mejorar los protocolos de congelación de semen, hoy en día se utilizan varios compuestos para proteger a los espermatozoides contra daños.
El propósito de este estudio es examinar el efecto del plasma rico en plaquetas sobre la calidad de los parámetros del esperma, el nivel de estrés oxidativo y la salud de la cromatina y evaluar el nivel de expresión de los genes BAX, BCL2 y Caspase9 en los espermatozoides congelados.
Métodos: En este estudio, se recolectaron 40 muestras de semen normales de pacientes que se derivaron al Centro de Investigación de Fertilidad de Jahad Daneshgahi en Qom. Estas muestras fueron congeladas en diferentes concentraciones de plasma rico en plaquetas al 2,5, 5, 10, 20 y 25% por congelación rápida y almacenadas en Nitrógeno líquido durante 14 días.
Los parámetros espermáticos se analizaron antes y después de la congelación según el protocolo de la OMS de 2010. Para determinar la dosis óptima y estudiar con mayor precisión el efecto del plasma rico en plaquetas deseado, se realizaron pruebas complementarias de fragmentación de ADN mediante SDFA y evaluación del nivel de expresión de los genes BAX, BCL2 y Caspas9 mediante PCR en tiempo real. Finalmente, los datos se analizaron mediante el análisis de varianza de una vía y la prueba post hoc de Tukey.
Resultados: Los resultados del estudio muestran que concentraciones de 5 y 10%, como las mejores dosis de plasma rico en plaquetas en el proceso de congelación, protegen significativamente los parámetros de motilidad, viabilidad y morfología de los espermatozoides; también provocan una disminución significativa de la fragmentación del ADN por congelación (p<0,05). Los resultados de la expresión génica muestran que la dosis óptima de plasma rico en plaquetas aumenta el nivel de expresión de los genes BAX, BCL2 y Caspas9 (p<0,05) y la proporción de BAX/BCL2 también muestra un aumento significativo.
Conclusión: Los resultados de este estudio muestran que la dosis adecuada de plasma rico en plaquetas puede influir positivamente en el esperma congelado-descongelado y protegerlo significativamente contra daños por congelación.
Objectives: Cryopreservation of spermatozoa is an important technique to help fertility. To improve semen freezing protocols, various compounds are used today to protect spermatozoa against damages. The purpose of this study is to examine the effect of platelet rich plasma on the quality of sperm parameters, oxidative stress level and chromatin heath and to assess the expression level of BAX, BCL2 and Caspase9 genes in the frozen sperm cells.
Methods: In this study, 40 normal semen samples were collected from patients who referred to the Fertility Research Center of Jahad Daneshgahi in Qom. These samples were frozen in different concentrations of platelet-rich plasma of 2.5, 5, 10, 20 and 25% by fast freezing and stored in liquid Nitrogen for 14 days. Sperm parameters were analyzed before and after freezing according to WHO 2010 protocol. To determine the optimal doze and study the effect of the intended platelet-rich plasma more accurately, complementary tests of DNA fragmentation using SDFA, and evaluation of the expression level of BAX, BCL2 and Caspas9 genes using Real-time PCR were conducted. The data was finally analyzed using one-way analysis of variance and post hoc-Tukey test.
Results: Study results show that concentrations of 5 and 10 %, as the best doses of platelet-rich plasma in the freezing process, significantly protect the parameters of motility, viability and morphology of the sperm; they also cause significant decrease in DNA fragmentation due to freezing (p<0.05). Gene expression results shows that optimal dose of platelet-rich plasma increases the expression level of BAX, BCL2 and Caspas9 genes (p<0.05) and the ratio of BAX/BCL2 shows a significant increase as well.
Conclusion: Results of this study show that appropriate dose of platelet-rich plasma can positively influence the frozen-thawed sperm and significantly protect the sperm against freezing damages.
