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Mariemma Ortega de López
Los operones moa y moe de Escherichia coli determinan la biosíntesis de la molibdopterina, en las primeras etapas del metabolismo del molibdocofactor, MoCo. En estudios previos usando una fusión transcripcional, las condiciones de cultivo modularon el nivel de expresión del operón moa y el crecimiento a expensas de glucosa lo redujeron. Este último efecto se investigó en el presente trabajo, realizando cinéticas aeróbicas de crecimiento y actividad enzimática β Gal. La glucosa ejerció una represión transitoria que se acentuó con el tiempo de cultivo y retardó el comienzo de la expresión máxima;
además el nivel de expresión disminuía al aumentar la concentración de ese azúcar. La represión permanente fue severa durante los primeros 90 minutos, pero disminuyó a lo largo del crecimiento exponencial; en presencia de AMPc exógeno, el nivel de expresión alcanzado incrementó parcial y tardíamente. Los resultados demostraron que la glucosa reprime la expresión transcripcional de a fusión moa::lac.
Además, permiten proponer un circuito de control positivo, cuya eficiencia incrementa con el crecimiento del cultivo donde el complejo regulador AMPc-CAP actuaría cuando se alcanza la fase estacionaria.
In Escherichia coli, the moa and moe operons determine the molybdopterin biosynthesis during the first stages of the molybdocofactor metabolism, MoCo. In previous studies by using a transcriptional fusion, the expression level of the moa operon was modulated by the culture conditions and reduced by growing at the expense of glucose. In the present work, this later effect was researched by monitoring aerobic kinetics of both: growth and enzimatic β Gal activity. The glucose carried out a transient repression which was prominent with the culture time and delayed the start of the maximum expression; in addition, by increasing that the sugar concentration the expression level was decreased. During the first 90 minutes, the permanent repression was strong but decreased along the exponential growth; in the presence of cAMP exogenous, the expression level was partial and lately increased. The results demostrated that glucose repress the moa::lac fusion transcriptional expression. In addition, they allow to propose a positive control circuit which efficence is increased with the culture growth, and where the CAP-cAMP regulatory complex could act when the stationary phase is reached
