Acceso usuarios
Mariemma Ortega de López
La biosíntesis del molibdo cofactor, MoCo, en Escherichia coli requiere productos codificados por los genes mol (moa, mob, mod, moe, mog, molR) y es insensible a los factores fisiológicos que inducen la biosíntesis de la molibdoenzima NRA. En el presente trabajo se construyó una fus ión de operón estabilizada moa::lac y se estudiaron los efectos de diferentes factores fisiológicos sobre su expresión transcripcional, en un medio sintético, estimando la biosíntesis acumulativa de la β Gal. En cultivos de fase estacionaria prolongada, la expresión de la fusión presentó el patrón de regulación siguiente: i. Ocurrió aún en ausencia de algún inductor exógeno y fue relativamente insensible a los controles que regulan la inducción de la NRA; ii. Incrementó bajo condiciones aeróbicas frente a la s anaeróbicas; iii. Incrementó con casaminoácidos en anaerobiosis, pero disminuyó en aerobiosis; iv. Disminuyó por crecimiento con glucosa. En las cinéticas de expresión, se observó que un cultivo creciendo constantemente en aerobiosis mostró un patrón bif ásico de inducción y los niveles incrementaron durante la fase exponencial, parecido a la biosíntesis del MoCo; además se confirmaron los efectos moduladores, mediados por la glucosa, las condiciones de aeración y la edad del cultivo. Se propone la necesid ad de circuitos de control acoplados para un balance adecuado entre la expresión del operón moa y la biosíntesis del MoCo.
The MoCo molybdocofactor biosynthesis in Escherichia coli requires products encoded by the mol genes ( moa, mob, mod, moe, molR ) and is ins ensitive to the physiological factors which induce the molibdoenzyme NRA biosynthesis. In the present work, it was constructed a stabilized moa::lac operon fusion, and the effects of physiological factors different on its transcriptional expression were st udied in a synthetic media, estimating the ßGal accumulative biosynthesis. In cultures of prolonged stationary phase, the fusion expression showed the regulation pattern as follow: i. Occurred without any possible hexogen inductor and was relatively insens itive to the controls which regulate the NRA induction; ii.
Increased under aerobic versus anaerobic conditions; iii. Increased with casaminoacids in anaerobiosis, but decreased in aerobiosis; iv. Decreased by growing with glucose in the expression kinetic s, it was observed that a culture constantly growing in aerobics showed an induction biphasic pattern and the levels increased during the exponential phase, similar to the MoCo biosynthesis; in addition, the modulator effects mediate by glucose, the aerati on conditions and the culture age were confirmed. The need of coupled control circuits for an adequate balance between the moa operon expression and the MoCo biosynthesis is proposed.
