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Mariemma Ortega de López
Las mutaciones narC-8 y narC-78, ambas en el operón narC(narGHJI), confieren el fenotipo Nit- y bloquean la expresión de la fusión transcripcional F(moa::lac)25, en E.coli K12. Ambas mutaciones fueron estudiadas comparativamente en el presente trabajo e identificadas como narG-. Los análisis de dominancia en trans mostraron que los niveles de restauración Nit+ fueron influenciados por el crecimiento con molibdeno, la mutación particular y el genotipo bacteriano. El ensayo de inmunoelectroforesis indicó diferencias en el reconocimiento de la subunidad a de la NRA. El mapeo por ligamiento reveló el orden secuencial .. narG-78.. narG-8 ... trp. Los análisis genéticos con cepas isogénicas evidenciaron que, la recombinación sustitutiva de narG- por narG+, restauró la expresión de la fusión y viceversa. Los análisis de dominancia en trans con cepas isogénicas mostraron, sorpresivamente, que la restauración Nit+ fue (i) mediada por el operón moa(ABCDE)+ y (ii) condicionada por la mutación doble F(moa::lac)25 narG-78. Los resultados obtenidos confirmaron el papel regulador de narG+ sobre la expresión transcripcional de moa, y sugirieron un posible papel regulador de ambos (narG,moa) en la respiración del nitrato.
In E. coli K12, both narC-8 y narC-78 mutations of the narC(narGHJI) operon confer the Nit- phenotype and block the expression of the F(moa::lac)25 transcriptional fusion. In the present work, both mutations were comparatively studied and identifyed as narG-. Trans-dominance analysis showed that Nit+ restauration levels were influenced by growing with molybdenum, particular mutation and bacterianne genotype. Immunoelectrophoresis assay indicated differences in the NRA asubunit recognition. Mapped-linking reveled the sequential order ... narG-78... narG-8 ... trp.
Genetic analysis evidenced in isogenic strains that, the narG+ substitutive recombination by narG-, restored the fusion expression and viceverse. Surprisingly, trans-dominance analysis showed in isogenic strains that Nit+ restoration was (i) moa(ABCDE)+ operon mediated and (ii) F(moa::lac)25 narG-78 double mutation conditioned. The results obtained confirmed the narG+ regulatory role over the moa operon transcriptional expression and suggested a regulatory role of both (narG+,moa) in the nitrate respiration.
