Acceso usuarios
Carlos Barragán Carballar, Homero Sáenz, Raúl Alberto Poutou, Marcela María Mercado, Luis A. Barrera A.
En la búsqueda de alternativas para mejorar la expresión de la enzima Iduronato Sulfatasa (IDSh) en la levadura Pichia pastoris, se realizó una Revisión Sistemática de la Literatura con el fin de recopilar información que permitiera relacionar los niveles de expresión de proteínas humanas recombinantes con la señal de secreción y las características propias de la molécula a expresar. Se hallaron 349 publicaciones de las cuales sólo 7 (2%) reportaron la expresión de proteínas que cumplían con los criterios de inclusión manejados en el estudio. Con la información obtenida en los 7 artículos se realizó una prueba de hipótesis tomando como muestras los datos recopilados y un análisis cualitativo de la información, con los cuales se evidenció que al reemplazar la señal de secreción nativa por el a-Factor como péptido líder se incrementa el nivel de expresión de proteínas humanas recombinantes en P. pastoris (p=0.053). Se encontró que la eliminación de la secuencia que codifica para el péptido nativo heterólogo en el ADNc de la proteína, es imprescindible para que el a-Factor pueda favorecer la secreción de proteínas heterólogas y por consiguiente incrementar el nivel de expresión. En el caso de la IDShr se halló que en la construcción GS115/pPIC9-IDS, aparecen dos secuencias de péptido señal al mismo tiempo, la nativa de la IDSh y la putativa proveniente de Saccharomyces cerevisiae; sin embargo, se han obtenidos expresiones hasta de ~30mmol/h mg de proteína, lo que deja la incógnita de un posible conflicto en el reconocimiento erróneo de una u otra señal de secreción, teniendo en cuenta el grado de hidrofobicidad de ambas.
Influence of a-Factor over the expression of hrIDS in Pichia pastoris: Literature review and computational analysis. In searching of alternatives to get the efficient secretions of the recombinant enzyme Iduronate Sulfatase (IDSh) in Pichia pastoris, we made a systematic review of the literature so that we could compile information to relate the expression level of human heterologous proteins, with secretion signal, and the characteristics of the molecules. 349 publications were found of which only 7 (2%) reported the expression of proteins that met find inclusion criteria. With the information obtained in these articles, we made a hypothesis test using the data compiled as samples and a qualitative analysis of the information. It was found that replacement of native secretion signal by a-Factor as leader peptide increases the level of expression of human heterologous proteins in P. pastoris (p=0.053). Moreover, the elimination of native signal peptide in the protein cDNA is 125 indispensable for the function of a-Factor in the secretion of recombinant proteins and for to increase the expression level. In the construct, GS115/pPIC9-IDS were simultaneously founded two sequences in the signal peptide, the native and the a-Factor. However, the activity found ~30 mmol/h mg of protein raises the question of a possible conflict between the two recognition sites. This may be the cause given the similarity in the hidrophobicity of those two sites.
